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應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,生物產(chǎn)業(yè) |
凝膠色譜柱廠家 在單克隆抗體藥物的初期研發(fā)階段中,通過對細胞株實施篩選,選出能產(chǎn)生滴度較高、ADCC活性較高的細胞株。此時常會用到的幾種評估方法是,通過生物檢定法測定ADCC活性;通過表面等離子共振法(SPR)測定人體IgG受體(FcγⅢa等)的親和力;通過LC/MS分析抗體酶切下來的糖鏈結(jié)構(gòu)等。但這些方法都需要花費大量的時間和人力。
能夠把這些復雜的評估分析法由繁化簡,并快速完成分析的HPLC色譜柱就是TSKgel FcR-IIIA-NPR。
使用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以直接分離抗體,無需對細胞培養(yǎng)液進行前處理??贵w主要可以分離出3個洗脫峰。已有研究表明,抗體糖鏈末端的半乳糖數(shù)量越多,在此色譜柱中的保留能力越強,而保留能力越強的洗脫峰,其ADCC活性就越高。
細胞培養(yǎng)液中單克隆抗體的分離
TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以用來測定和監(jiān)控細胞培養(yǎng)時抗體糖鏈的性狀變化。取不同培養(yǎng)天數(shù)的細胞培養(yǎng)液,使用Protein A填料對抗體樣品粗純后,再采用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱分析的結(jié)果如下圖所示。
凝膠色譜柱廠家 抗體細胞培養(yǎng)天數(shù)和產(chǎn)生抗體的變化
隨著培養(yǎng)天數(shù)的延長,抗體的3個洗脫峰會向前側(cè)的洗脫峰位移。雖然延長了細胞培養(yǎng)天數(shù),抗體的產(chǎn)量增加,但是由于受到細胞外糖鏈修飾酶的影響,在色譜柱中的保留能力較高的抗體(多糖的末端半乳糖數(shù)量較多的抗體)的洗脫峰反而減少了。因此,可以推定產(chǎn)生的抗體的ADCC活性已經(jīng)降低。
TSKgel FcR-IIIA-NPR的主要分析用途
①確認不同細胞株(CHO細胞、HEK細胞等)中抗體的性狀變化。
②確認多個細胞株篩選時抗體的性狀變化。
③確認當改變細胞培養(yǎng)基添加劑時抗體的性狀變化
④細胞培養(yǎng)過程中隨培養(yǎng)天數(shù)的變化導致抗體性狀變化的確認。
⑤細胞培養(yǎng)規(guī)模放大(更改培養(yǎng)方法)時,確認抗體是否發(fā)生性狀變化。
上一產(chǎn)品:凝膠色譜柱up-sw3000資料
下一產(chǎn)品:洛匹那韋利托那韋的檢測色譜柱
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