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應(yīng)用SEC柱G4000SWXl色譜柱

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應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

應(yīng)用SEC柱G4000SWXl色譜柱 口蹄疫(Foot-and-mouthdisease,FMD)是傳染性的家畜疫病之一。目前,我國對口蹄疫采取以滅活疫苗免疫為主的防控策略,使用的滅活疫苗以雙相油乳劑疫苗為主,疫苗的質(zhì)量對于口蹄疫的防控關(guān)重要[1-2]。疫苗對動物的保護效果主要取決于兩個方面,一是疫苗毒株與流行毒株的相似程度,二是疫苗中抗原的含量[3]。使用體積排阻色譜法(G4000SWxl色譜柱)對滅活的口蹄疫病毒液中的 146S 抗原進行檢測,該技術(shù)在疫苗生產(chǎn)工藝研究和質(zhì)量控制中均具有應(yīng)用前景。

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色譜條件

應(yīng)用SEC柱G4000SWXl色譜柱(7.8 mm×30 cm) 色譜柱 (TOSOH)、TSKgel guard column SWXL(6.0mm×4cm)保護柱(TOSOH);流動相:pH7.2的 50 mmol/L 磷酸緩沖液,含 0.1 mol/L Na2SO4; 紫外檢測器檢測波長:259 nm;流速:0.6 mL/min。將 146S 純化樣品色譜檢測結(jié)果作圖,經(jīng)線性回歸處理,得到146S的回歸方程為:Y=45216X78 422 (R2=0.996, n=10),結(jié)果表明, 146S 0.56–67.42 µg/mL 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,當濃度為 0.56 µg/mL 時,S/N=14.62,滿足定量限要求。146S 抗原保留時間在 13–14 min 。

耐受性實驗

通過改變流動相pH值和環(huán)境溫度,考察方法耐受性。TSKgel G4000SWxl色譜柱pH適用范圍在2.5-7.5,且應(yīng)置于4-30°C。維持146S抗原穩(wěn)定性的適pH值為7.8。調(diào)節(jié)流動相pH范圍在6.9-7.5之間。146S抗原色譜峰保留時間和峰形*,考慮到色譜柱耐受性,選用該流動相未經(jīng)過調(diào)節(jié)的pH值7.2-7.4。為防止146S降解,需注意實驗室溫度不應(yīng)過高,且儀器樣品盤英設(shè)定低溫進樣。

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