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本質(zhì)上是填料(固定相)的不同,正相色譜柱填料極性強(qiáng),洗脫順序由弱到強(qiáng);反相色譜柱填料極性弱,洗脫順序由強(qiáng)到弱。以下是詳細(xì)說明:
1、正相色譜
正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其他具有極性官能團(tuán)胺基團(tuán),如(NH2,APS)和氰基團(tuán)(CN,CPS)的鍵合相填料。
由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他極性基團(tuán)極性較強(qiáng),因此,分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小,即極性較弱的組份先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
2、反向色譜
反向色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì),表面鍵合有極性相對較弱官能團(tuán)的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強(qiáng),通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分先被沖洗出,而極性弱的組分會在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。
常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
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