c18色譜柱的柱越長(zhǎng),總柱效越高(n值越大),柱越長(zhǎng),分析時(shí)間也越長(zhǎng)。250—300mm是普遍的柱長(zhǎng),實(shí)驗(yàn)室一半以上的工作都是采用此規(guī)格柱子,一般用來(lái)分離l0到50個(gè)組份的中等至復(fù)雜混合物;500—600mm,要求較高分辨率的應(yīng)用,—般用來(lái)分離大于50個(gè)組份或包含有難分離物質(zhì)的復(fù)雜樣品程序升溫分析。
c18色譜柱的柱效率與柱半徑平方成反比,內(nèi)徑越小柱效越高,但內(nèi)徑越大,柱容量也增加,允許進(jìn)樣量就越多。當(dāng)進(jìn)樣量超過柱容量時(shí),則因柱內(nèi)每塊理論板內(nèi)不能建立平衡,將會(huì)導(dǎo)致色譜蜂畸變,柱分辨率降低,重現(xiàn)性不好。
因此對(duì)于復(fù)雜樣品需要準(zhǔn)確分離,要使用小內(nèi)徑柱子。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物,為了增加樣品容量就要使用內(nèi)徑大的柱子,目前實(shí)驗(yàn)室使用常見的柱子內(nèi)徑一般是4.6mm。
如何更換色譜柱,液相色譜柱怎么換:
1、首先把原來(lái)儀器上的柱子用甲醇或其他有溶劑沖下干凈后,沖去柱子中殘留的緩沖鹽和之前難以洗脫的組分。
2、然后把柱子兩邊的PEAK頭擰下來(lái),用配套的塞子將換下的柱子兩頭堵上。
3、換上新的色譜柱時(shí),應(yīng)先將需換上的柱子兩邊的塞子旋開,確定好柱子標(biāo)示的方向后,先接柱子入口端,并使柱子出口端略高于入口端,這樣就使流動(dòng)相流過柱子時(shí)能將其中的氣泡排出,待氣泡排盡后,再接上柱子的出口端。
4、注意拆柱子時(shí)要關(guān)流速,后接柱子時(shí)要開流速。